文|胡一舸

编辑|胡一舸

前言

山茶是一种常见的木质树种，它的果实经过提炼后，可以制成一种优质油脂。山茶中含有许多对人类身体有好处的营养成份，具有很好的药效。

《本草纲目》中也对山茶的药效进行了介绍，指出山茶具有降压、消暑、抗菌、抗癌、抗病毒等作用。

山茶中含有大量的生理活性成份，在抵御各种疾病和病菌的侵袭方面都有很大的作用，比如，山茶中所含的茶皂苷，就具有溶解血栓，抗炎，抗癌等作用。

茶叶中的多酚类及山茶苷类成分，具有显著的降血脂及抗氧化作用，对肿瘤细胞具有显著的抑制作用。

角鲨烯和黄酮具有很好的抗癌，消炎，抗菌等功效，茶油中含有大量的不饱和脂肪酸，如油酸、亚油酸等，能降低血浆LDL含量，对高血压、冠心病等心脑血管病的防治起到了重要的作用。

赣南作为油茶的主产区，油茶资源十分丰富，因此，对油茶的萃取方法进行改良，并对其进行药理活性的研究，对于油茶的高附加值的保健品和药品的研发将起到重要的促进作用。

实验材料与方法

实验材料：江西赣州油茶树种植，茶叶精油，经挤压或用有机溶液萃取，金葡菌，大肠杆菌，酵母菌，枯草杆菌，绿霉菌，柑橘绿霉菌，氨苄青霉素，卡那霉素，DMSO，LB培养液，土豆培养液。

将50μL的感受态大肠杆菌进行培养，展开菌体活化，之后将菌体收集起来，并在酶标仪A600处稀释成吸光值在0.5~0.6之间的菌悬液。

使用DMSO，将茶油配制成3.125mg/mL、6.25mg/mL、12.5mg/mL、25mg/mL、50mg/mL、100mg/mL和200mg/mL7个浓度梯度。

取100μL茶油溶液与100mg/mL菌悬液进行混合，放置1h之后，将混合液涂布到固体LB培养基上。

将抗生素与菌液进行混合，涂布于培养基上，以此为阳性对照。将所有培养基放在37℃恒温培养箱中，进行12h左右的培养，取出并记录菌斑量。

取一小部分的干酵母，对其进行激活，之后，将菌体采集起来，并在酶标仪A600处稀释成具有0.5到0.6之间吸收光值的菌悬浮液。

使用DMSO，将茶油配制成3.125mg/mL、6.25mg/mL、12.5mg/mL、25mg/mL、50mg/mL、100mg/mL和200mg/mL7个浓度梯度。

之后，将无菌水、DMSO作为2组空白对照。准备好一份马铃薯固体培养基，以备使用。

将100μL的茶油溶液与100μL菌悬浮液混合，放置1小时，之后，将茶油和菌悬浮液的混合液涂抹到马铃薯培养基上。

将所有的培养基都放在37℃的恒温培养箱中，进行10~14小时的培养，最后，将菌斑量进行了记录。

使用马铃薯培养基培养柑橘青、绿霉菌，从中挑选出一个菌落，在10mL无菌水中，再进行10倍的稀释，最终变成菌悬液，在配好之后，可以使用。

使用DMSO，将茶油配制成3.125mg/mL、6.25mg/mL、12.5mg/mL、25mg/mL、50mg/mL、100mg/mL和200mg/mL7个浓度梯度。

之后，以无菌水、DMSO为2组对照。配制马铃薯培养基基备用。取100μL茶油溶液与100μL菌悬液进行混合，放置1小时，之后将混合液涂布到固体马铃薯培养基上。

将混合液涂布到固体马铃薯培养基上，将其放到28℃恒温培养箱中培养72h左右，取出并记录菌斑量。

茶油抑制细菌活性

Escherichiacoli是一种革兰氏阴性菌，主要存在于人的大肠和小肠，它对人没有危害，但是会导致禽类传染病。

将Escherichiacoli的菌液用两种浓度的茶叶油进行处理，会使Escherichiacoli的活力发生变化。

如表1所示，在无菌的对照组中，添加了无菌的清水后，细菌数量明显增加，添加DMSO后，水质中的细菌数量仅有轻微下降，表明DMSO对水质中细菌的生长具有轻微的抑制作用。

与对照比较，在添加不同浓度的油剂后，Escherichiacoli的增殖受到了一定的影响，且随油剂的升高而降低，在100mg/mL时，Escherichiacoli的增殖受到了彻底的抑制。

金黄色葡萄球菌能够导致各种人体疾病，并且还能够演化成为超级病菌，到现在为止，只有一种方法能够阻止这种超级病菌的成长。

通过使用两种不同浓度的茶叶油来处理，两个对照组都被这种病菌所覆盖，而随着茶叶油的浓度提高，实验组中的金色葡萄球菌的数量呈现出递减的趋势。

结果表明，在200mg/mL的压力下，无论是从茶叶中还是从茶叶中提取的压力物质，都能有效地抑制细菌的生长。

在100mg/mL的溶液中，用一种有机溶剂萃取的茶叶油对细菌也能产生全部的抑制作用，其抑制作用和卡那霉素相当（见表2）。在含有氨苄西林的培养基上，由于存在抗性，只有少量的菌点存在。

枯草芽孢杆菌属于一种消耗氧的细菌，因为它没有致病性、不易产生抗药性、环境兼容性好等优势，所以它被广泛地用于养殖业、发酵工业等日常工业生产中。

通过使用不同浓度的2种茶叶油，得到的结果是，除了被氨苄青霉素和卡那霉素处理的培养基外，其他的培养基都被枯草芽孢杆菌所覆盖，其数量与对照组没有太大的差异。

与卡那霉素组和氨苄组比较，无论从压榨还是从有机溶剂中萃取，均无任何抑制作用，且不随茶叶油的浓度而变化，而在茶叶油的处理中，由于DMSO的抑制作用较弱（见表3)。

酵母菌属于一种在大自然中随处可见的单细胞真菌，它拥有很强的适应能力，可以将一些难以分解的物质进行代谢，从而保持生态环境的稳定，它被广泛地应用于一种天然发酵剂。

如今，酵母菌感染已经成为白血病、器官移植、早产儿等特定人群的严重感染性疾病。

使用不同浓度的2种茶油处理的酵母菌，2组空白对照都长满了菌，用茶油处理的培养基，随着茶油浓度的提高，细菌数量也随之降低。

在200mg/mL的条件下，压榨后的茶叶油能对细菌的增殖起到彻底的抑制作用，且没有形成菌斑。

在浓度达到100mg/mL的时候，有机溶剂提取的茶油能够彻底地抑制菌落的生长，并且在培养基中也没有长出任何菌斑（见表4）。与之相比较，有机溶剂提取的茶油比压榨的茶油具有更强大的抑制效果。

从研究的结果可以看出，两种提取方式的茶油都会对酵母菌造成抑制，并且使用更精细的有机溶剂提取的茶油对其抑制作用更明显。

青霉是一种异养需氧的真菌，其营养菌丝体为墨绿色，在腐烂的果蔬、食品中以及潮湿的衣物中均可滋生出青霉，多数为灰绿色，也可引发柑橘青霉病害，该病害在中国南部及东南亚均有广泛的应用。

用压榨的茶油和用有机溶剂提取的茶油，对青霉菌和柑橘绿霉菌都没有任何的抑制作用，而且它也不会被茶油的浓度所改变。

因此，茶油处理的数量会有所下降，主要是由于DMSO对其有轻微的抑制作用，而不是茶油对菌产生的抑制作用，即茶油不具备对青霉菌和绿霉菌的抑制作用（见表5、6）。

结论

以100mg/mL为起始浓度的有机萃取茶叶油，其对大肠埃希菌的抑制作用随着时间的推移逐渐增强。对金葡菌，100mg/mL的抑菌效果随着剂量的增大而提高。

在最初的情况下，压榨的茶油对E.coli的抑制效果是100mg/mL，而且随着浓度的增大，其抑制效果也会随之增大，在200mg/mL范围内，对金葡菌的抑菌效果随着剂量的增大而提高。

在200mg/mL范围内，其对霉菌的抑制作用随着浓度的增大而增大，但对青霉菌、绿霉菌及枯草细菌均无明显的抑菌活性，且不受茶叶油脂含量的影响。

由试验结果可知，不管采用哪一种方法，都会对细菌有一定的抑制作用，这表明，提取方式并不会对茶叶的抗菌性有决定性的影响。

第一，压榨茶籽，会对茶籽产生物理性的伤害，同时也可能会伤害到其中的有效成分，从而使得压榨得到的茶油不具有这些有效成分，或者这些有效成分因被破坏无法起到应有的作用。

而有机溶剂提取是采用化学方法，物理伤害小于压榨方式，故而保留到了容易被物理破坏的有效成分，最终有机溶剂提取茶油抑菌效果更佳。

第二，传统的传统萃取技术仅能获得茶叶本身的液状物质，而传统萃取技术却能够将茶叶种子中的非液状物质分离出来，加入到茶叶中，使茶叶中的活性物质含量更高。

第三，传统的压榨工艺不会改变茶叶种子和油脂的化学结构，但有机萃取技术却会改变茶叶的组分，改变茶叶的理化性质，进而改变茶叶的性质，进而降低茶叶的药效。

参考文献：

［1］邓小莲，谢光盛《漫话茶油》

［2］吴少锦，邹荣灿，石治敏，等《市售山茶油功能性脂肪酸组成分析》

［3］于春霞，王宇，王爱青《茶多酚的应用研究进展》

［4］谢钰，陈清勇，周建英，等《茶多酚体外诱导人肺癌细胞凋亡的机理研究》