食用菌菌种转接、组织分离等操作中的消毒技术要点
食用菌接种环境的消毒充分与否充分,在很大程度上影响了接种的成功率。因此,要想降低我们的污染率、提高我们的生产效率,我们就要在实际生产中熟悉每一个环节的消毒技术要点。
接种环境的消毒1、接种室的消毒:一般是采用熏蒸消毒法、臭氧消毒法、紫外线灯消毒。熏蒸消毒法以甲醛熏蒸消毒为例,消毒时每立方米空间一般用甲醛10mL,加入半量的高锰酸钾(5~7g)使甲醛氧化挥发。在操作时如果接种室的密闭性较差也可按比例适当地加大药品用量,确保其可以达到有效剂量。具体操作方法是先将高锰酸钾放入接种室容器中,再注入甲醛,立即产生强烈刺激的甲醛气体。熏蒸时间至少保持30分钟以上。除了甲醛消毒外还可以采用其他药物进行熏蒸。
实验室采用臭氧消毒,消毒时要根据所选用的臭氧机型号,接种室的密闭性、体积等条件灵活掌握消毒时间,确保可以达到有效的消毒浓度和消毒时间。
为了保证消毒效果,消毒之前还要先提高接种室内的空气相对湿度到80%左右,一般我们采用往地面洒水的方法来提高空气的相对湿度。
紫外线灯消毒时可根据紫外线灯的功率确定紫外线灯与被消毒物体之间距离与消毒时间。一般距离不能超过1m,消毒时间维持在20分钟左右,才能达到最佳的消毒效果。
接种箱和超净工作台的消毒(1) 接种箱消毒:接种箱一般也是采用熏蒸消毒或臭氧消毒,具体的消毒方法与接种室消毒方法类似。实验室一般使用接种箱专用的小型臭氧机进行臭氧消毒,而使用臭氧消毒时候,在接种全过程都要开启臭氧机。除此之外,接种箱在消毒前还需要用75%酒精棉球擦拭、清洁接种箱内外后放入接种所需的物品,再对接种箱进行消毒。
(2) 超净工作台消毒:用75%酒精棉球擦拭台面后放置接种所需物品,开启超净工作台上的紫外灯,照射20分钟后使用。
手、菌种试管和子实体的消毒在进入接种室之前,应佩戴口罩并用洗手液洗手(如果留有长指甲需提前进行修剪,有带戒指的提前把戒指摘下)再用75%的酒精棉球擦手。进入接菌室后再次用75%酒精棉球擦一次手,此时也同样要用75%的酒精棉球把菌种试管进行擦拭消毒。两次擦手都要注意首先擦拭指甲缝,其次是擦拭指肚,最后擦拭手掌,手背。
如果进行组织分离时,应先将选好的子实体用纯净水冲洗干净,再用75%的酒精棉球将子实体进行擦拭消毒。
接种工具的消毒手跟试管消毒完成后,用酒精棉球擦拭接种钩,再放到酒精灯火焰外焰灼烧接种钩并反复通过3次,然后将接种钩放在试管口冷却后再进行接种操作。
在整个接种过程中应保证试管口始终保持在酒精灯外焰上方10cm的无菌区。接种完成后,再将接种钩在火焰上方灼烧灭菌,以免造成污染。
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